lunes, 13 de octubre de 2014

PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS

Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son 
empleadas principalmente la identificación y clasificación 
de bacterias y hongos. 

Se pueden resumir en los siguientes puntos:
•Sustrato (contenido en el medio de cultivo)
•Enzima o vía metabólica (secretada o en el interior del 
microorganismo)
•Producto 

•Revelador y/o indicador (aunque algunas no los emplean)


HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN
Agar Almidón 
Sustrato: Almidón (polímero de glucosa).
Enzima: Amilasa (exoenzima).
Producto: Glucosa.
Revelador: Lugol. 
El lugol con el almidón forman un complejo color café-púrpura 
que desaparece cuando el almidón ha sido degradado.

DEGRADACION DE LA CASEINA
Agar Leche Descremada
Sustrato: Caseína (proteína).
Enzima: Caseinasa (Proteasa, 
exoenzima).
Producto: Aminoácidos.
Revelador: No requiere. 

HIDROLISIS DE LA LICITINA Y REDUCCION DEL
TELURIO
Agar yema de huevo/Agar Baird Parker
Sustrato: Lecitina.
Enzima: Lecitinasa.
Producto: Fosforilcolina.
Revelador: No requiere.

FERMENTACION DE CARBOHIDRATOS
Medio base rojo de fenol más 
carbohidrato o polialcohol, con 
campana de fermentación (Durham).
Sustrato: Carbohidrato o polialcohol.
Vía: Fermentativa.
Producto: Ácidos orgánicos.
Indicador: Cualquier indicador de pH.


OXIDACION Y FERMENTACION
Hugh and Leifson
Sustrato: Carbohidratos.
Vías: Fermentativa y/u Oxidativa.
Producto: Acido pirúvico.
Indicador: Azul de bromotimol u 
otro indicador ácido/base

Rojo de Metilo/Voges Proskauer
Caldo RM/VP
Sustrato: Glucosa.
Vías: Fermentación ácida o neutra.
Producto: Acido orgánicos o acetoína.
Reveladores: Solución de Rojo de Metilo, 
Alfa Naftol y KOH 40%.

UTILIZACION DE CITRTATO
Medio de Citrato de Simmons
Sustrato: Citrato de sodio.
Vía: Varias dependientes del pH del 
medio.
Producto: Acetato/formato en 
condiciones alcalinas y Acetato, 
CO
2, lactato/Acetoína y CO
2 en 
condiciones ácidas.
Indicador: Azul de bromotimo






Curva de crecimiento

Curva de crecimiento.

CRECIMIENTO :Se define crecimiento como un aumento en la cantidad de constituyentes y estructuras celulares,cuando hay crecimiento en ausencia de división celular hay aumento en el tamaño y peso de la célula. Mientras que cuando el crecimiento es seguido de división celular hay un aumento en el número de células.

Es importante distinguir entre el crecimiento de células individuales y el crecimiento de poblaciones, ya que en los microorganismos debido a su pequeño tamaño no se hacen estudios de crecimiento individual sino estudios de crecimiento de poblaciones.

El crecimiento de una población es el aumento del número de células como consecuencia de un crecimiento individual y posterior división. El crecimiento de una población ocurre de una manera exponencial. El crecimiento exponencial es una consecuencia del hecho de que cada célula se divide dando dos (2) células hijas, las cuales al dividirse darán cada una dos células hijas, así es que en cada período de división la población se duplica.

La velocidad de crecimiento exponencial se expresa como tiempo de generación (G) y este se define como el tiempo que tarda una población en duplicarse. Los tiempos de generación varían ampliamente entre los microorganismos, algunos crecen rápidamente y presentan tiempos de generación de unos 30 minutos y otros tienen tiempos de generación de varias horas o incluso días.

CURVA DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

Esta curva se divide en cuatro fases denominadas fase de latencia, fase exponencial o fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte.

Fase de latencia

Cuando una población bacteriana es inoculada en medio fresco, el crecimiento usualmente no comienza de inmediato sino después de un tiempo llamado de latencia, que puede ser corto o largo dependiendo de las condiciones.

La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son transferidos a una nueva condición. En esta fase se producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo medio ambiente. En esta fase no hay incremento en el número de células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células.

Si un cultivo que está creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad. Si el inóculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se presenta la fase de latencia esto se debe a que las células generalmente agotan una serie de coenzimas esenciales u otros constituyentes celulares y se requiere cierto tiempo para su resíntesis.

También se observa latencia cuando el inóculo está formado por células que han sido dañadas
pero no muertas, bien sea por tratamiento con calor, radiaciones o sustancias químicas,
puesto que requieren reparar dicho daño. En el caso de que una población se transfiera de un medio de cultivo rico a un medio pobre, se observa latencia puesto que es necesario que las células para poder seguir creciendo tengan una serie de enzimas para poder sintetizar algunos metabolitos esenciales que no están presentes en el medio.

Fase exponencial o fase logarítmica

Es el período de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente,
es decir que cada vez que pasa un tiempo de generación la población se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo, etc.) afectan a la velocidad de crecimiento exponencial.

Fase estacionaria

En cultivos en recipientes cerrados una población no puede crecer indefinidamente en forma exponencial. Las limitaciones del crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el espacio disponible o por una combinación de las causas anteriores. Este periodo durante el cual cesa el crecimiento se conoce como fase estacionaria.

Fase de muerte

Si la incubación continúa después de que una población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden seguir vivas y continuar metabolisando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte.

jueves, 9 de octubre de 2014

RESPIRACION BACTERIANA

La Respiración Aerobia y Anaerobia

La respiración aerobia es la que utiliza oxígeno para extraer energía de la glucosa. Se efectúa en el interior de las células, en los organelos llamadosmitocondrias.
Durante el proceso respiratorio, parte de la energía contenida en la glucosa pasa a las moléculas de ATP. Con esta energía se alimentan, excretan los desechos, se reproducen y realizan todas las funciones que les permiten vivir. Tanto el dióxido de carbono como el agua salen de la célula y del cuerpo del ser vivo (Si se trata de un organismo pluricelular) por que constituyen sustancias de desecho. La energía puede utilizarse de inmediato o almacenarse para su uso posterior.
Las bacterias no tienen mitocondrias, por lo cual la respiración se efectúa en sucitoplasma. En el resto de los organismos pertenecientes a los 4 reinos (Protistas, hongos, plantas y animales) si existen estos organelos.
Algunas células tienen más mitocondrias que otras; por ejemplo, las neuronas, las células musculares y los espermatozoides requieren de altas cantidades de energía y por ello tienen numerosas mitocondrias.

La respiración Anaerobia

La respiración anaerobia consiste en que la célula obtiene energía de una sustancia sin utilizar oxígeno; al hacerlo, divide esa sustancia en otras; a la respiración anaerobia también se le llamafermentación.Probablemente la respiración anaerobia más conocida sea la de laslavaduras de la cerveza (Saccharomyces cerevisiae), que son hongos unicelulares.
Para elaborar la cerveza se utilizan semillas de cebada, las cuales contienen glucosa, sustancia de la cual las levaduras obtienen la energía. Las semillas de cebada son combinan con agua y la flor de una planta llamada lúpulo, que le da sabor a esta bebida. Los ingredientes se mezclan y luego se filtran.
El líquido resultante, que contiene la glucosa, se deposita en barriles de madera, junto con las levaduras y se deja reposar varios meses o años; durante éste tiempo, las levaduras utilizan la glucosa para obtener energía y la transforman en un tipo de alcohol llamado etanol. Supongamos que una levadura toma una molécula de glucosa 

miércoles, 8 de octubre de 2014

Tipos de asa y su uso.



                                                      Tipos de asa y su uso


  • Asa en argolla o anillo, no calibrada.Generalmente son de alambre de nichrome. Sirve para siembra por estrias e inoculaciones en general
  • Asa en recta o en hilo.
    Sirve para trasladar una sola colonia o medios de identificacion o subcultivo.
  • Asa de platino amarillo.
    Calibrada para tomar 0.001 ml para urucultivo
  • Asa espatulada
    Paramanipular colnias duras y tomar muestras¨
  • Asa de alambre grueso en L.
    Sirve para purificar colonias de hongos y procedimientos especiales.
  • Aguja de deseccion con punta aguda.
    Sirve para purificar colonias pequeñas y distribuir las preparaciones de hongos en fresco.

sábado, 4 de octubre de 2014

TÉCNICAS DE ESTRIADO.

Técnica de estriado básico

Calienta el asa de inoculación hasta que quede de color rojo intenso para eliminar cualquier microorganismo. Deja que el asa se enfríe durante 20 o 30 segundos, pero no lo soples para no reintroducir microorganismos. Recoge una muestra del cultivo bacteriano a partir de un caldo o una placa de Petri. No necesitas de una presencia bacteriana visible. Levanta la tapa de la placa de Petri que vas a sembrar en un ángulo de 45 grados, coloca el asa en la parte de atrás del plato, toca con el asa en el medio y pásalo a través de la superficie de la placa con un movimiento en forma de S desde atrás hacia adelante. Algunos laboratorios pueden querer que gires la placa a 90 grados y repitas el procedimiento de inoculación para una cobertura completa.

Estriado por cuadrantes

Este es también un método de estriado para el aislamiento, pero utiliza cuatro secciones en lugar de tres. Divide la parte inferior de la placa de Petri en cuatro partes iguales con un marcador permanente. Utiliza los procedimientos básicos de estriado para inocular el primer cuadrante. Trabaja en el sentido de las agujas del reloj, llevando los microorganismos de un cuadrante a otro, como lo hiciste con el método del estratificado en T y calentando el asa antes de inocular el siguiente cuadrante. Calienta el asa y barre en forma de S desde el primero hasta el cuadrante adyacente.