Técnicas de vaciado.

Técnicas de vaciado.

• MEDIOS SÓLIDOS EN PLACA: cuando se necesita trabajar o preparar placas de medios de cultivo, efectuar el proceso de vaciado en campana de flujo laminar o bien en la zona de trabajo bacteriológico del mechero siguiendo las siguientes recomendaciones:
  1.- Una vez que el medio sale de la autoclave dejar enfriar
   a temperatura ambiente o a baño Maria a una temperatura 45-2C
  2.- Preparar las placas en la mesa previamente etiquetadas y proceder a vaciar el medio.
  3.- Dejar entreabiertas las placas al momento para que el agua se evapore y no se condense en la tapa, una vez desplazada el agua tapar rápidamente.
  4.- En caso de existir burbujas en el medio hay que flamear con la flama del mechero, procurando agarrar el collarín para que no se apague, tapar la placa y dejar solidificar.
  5.- Los medios preparados deben conservarse preferentemente en el refrigerador y protegidos con bolsas de plástico.
  6.- Todos los medios de cultivo preparados deben llevar fecha de preparación.
  7.- De cada lote preparado de medio de cultivo, incubar dos placas a 35·C durante 48 horas como prueba de esterilidad.
• MEDIOS EN MATRAZ PARA VACIADO EN PLACA: cuando se necesite preparar matraces con medios de cultivos, calcular lo que se necesite colocarle un tapón de algodón con gasa y fundir el medio.
  1.- Esterilizar el medio a las condiciones que indica el fabricante.
  2.- Una vez que el medio sale de la autoclave dejar enfriar a temperatura ambiente o en un baño Maria a una temperatura de 45-2C
  3.- Preparar las placas en la mesa previamente etiquetadas y ya con el inoculo proceder a vaciar el medio.
  4.- Después inocular las disoluciones de las muestras preparadas, agregar de 12 a 15 ml. del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de derecha a izquierda, 6 en sentido contrario a las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6 de atrás hacia adelante, sobre una superficie lisa y horizontal hasta lograr una completa incorporación del inoculo en el medio, cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas y dejar solidificar.
• MEDIOS EN MATRAZ PARA VACIADO EN PLACA DE MOHOS Y LEVADURAS: cuando se necesite preparar matraces con medios de cultivo, calcular lo que se necesite, colocarle un tapón de algodón con gasa y fundir el medio.
  1.- Esterilizar el medio a ñas condiciones que indica el fabricante.
  2.- Una vez que el medio sale de la autoclave, dejar enfriar a temperatura ambiente o a un baño Maria a una temperatura de 45-2C y adicionarle 1.4 ml. de ácido tartárico al 10% por cada 100 ml. de medio.
  3.- Preparar las placas en la mesa previamente etiquetadas y ya con el inoculo proceder a vaciar el medio.
• MEDIOS LÍQUIDOS EN TUBO:
  1.- Preparar el medio de cultivo (caldo) en un vaso de precipitados y colocarlo en un dosificador regulado a 9 ml. y proceder a colocarlo en tubos de ensaye de 16 X 150 mm. con tapón de rosca, previamente etiquetados y contenido una campaña de Durban.
  2.- Procurar no cerrar los tubos de ensaye hasta el tope para evitar que estos exploten.
  3.- Colocar los tubos en un bote de lamina y colocarle papel kraft a manera de gorro y proceder a esterilizar a condiciones que indique el fabricante.
  4.- Una vez esterilizados, dejar enfriar y colocarlos en un lugar fresca y seco o en el refrigerador para evitar la evaporación.
  5.- Cuando se requiere tubos con otro tipo de caldo se coloca a cada uno 3 ml.